אין דעם פּראָצעס פון קאַנדאַקטינג גענעטיק שטודיום, מיר אָפט טרעפן ניט גענוגיק רנאַ סאַמפּאַלז, למשל, פֿאַר לערנען קליינטשיק אַנאַטאַמיקאַל מויל טומאָרס, אפילו איין-צעל סאַמפּאַלז, און סאַמפּאַלז פון ספּעציפיש דזשין מיוטיישאַנז וואָס זענען טראַנסקריבעד אין זייער נידעריק לעוועלס אין מענטש סעלז.דאָך, פֿאַר די COVID-19 פּראָבע, אויב די סוואַבז זענען נישט אין די רעכט אָרט אָדער נישט גענוג מאָל בעשאַס די מוסטערונג, די מוסטער גרייס וועט זיין זייער נידעריק, וואָס איז וואָס די קאַמישאַן פון געזונט און משפּחה פּלאַנירונג איז ארויס מיט צוויי טעג צוריק און דורכגעגאנגען די פּראָבע, און אויב די נוקלעיק זויער סאַמפּלער האט נישט נעמען זעקס סאַמפּאַלז, איר קענען באַריכט עס.
די סענסיטיוויטי פון די רייידזשאַנט איז וויכטיק ווייַל מיר האָבן דעם פּראָבלעם אָדער דעם פּראָבלעם, אַזוי וואָס קענען מיר טאָן צו פֿאַרבעסערן די סענסיטיוויטי פון RT-PCR?
איידער מיר דיסקוטירן מעגלעך סאַלושאַנז, לאָזן ס דערמאָנען צוויי גרויס קאַמפּלאַקיישאַנז מיט די סיטואַציע וואָס מיר נאָר דערמאנט.
ערשטער פון אַלע, מיר זאָרג וועגן רנאַ אָנווער ווען מיר האָבן בלויז אַ ביסל צעל פּאַפּיאַליישאַנז אין אונדזער מוסטער.אויב טראדיציאנעלן צעשיידונג און רייניקונג מעטהאָדס זענען געניצט, אַזאַ ווי זייַל אופֿן אָדער נוקלעיק זויער אָפּזאַץ אופֿן, עס איז אַ הויך מעגלעכקייט אַז די ביסל סאַמפּאַלז וועט זיין פאַרפאַלן.איין לייזונג איז צו לייגן אַ קאַריער מאַלאַקיול, אַזאַ ווי טרנאַ, אָבער אפילו דעמאָלט, עס איז קיין גאַראַנטירן אַז אונדזער אָפּזוך עקספּערימענט איז גוט.
אַזוי וואָס איז אַ בעסער וועג?א גוט אָפּציע פֿאַר געבילדעטער סעלז אָדער מיקראָאַנאַטאָמיקאַל סאַמפּאַלז איז צו נוצן דירעקט ליסיס.
דער געדאַנק איז צו שפּאַלטן די סעלז פֿאַר 5 מינוט, מעלדונג די רנאַ אין די לייזונג, און האַלטן די אָפּרוף פֿאַר 2 מינוט, און לייגן די ליסאַטע גלייַך צו די פאַרקערט טראַנסקריפּציע אָפּרוף אַזוי אַז קיין רנאַ איז פאַרפאַלן, און לעסאָף שטעלן די ריזאַלטינג cDNA גלייַך. אין די פאַקטיש-צייט אָפּרוף.
אָבער וואָס אויב, ווייַל פון אַ לימיטעד סטאַרטינג פונט אָדער אַ קליין סומע פון ציל דזשין אויסדרוק, מיר קענען ריסייקאַל אַלע די רנאַ און נאָך נישט צושטעלן גענוג טעמפּלאַטעס צו באַקומען אַ גוט פאַקטיש-צייט סיגנאַל?
אין דעם פאַל, די פאַר-אַמפּלאַפאַקיישאַן שריט קענען זיין זייער נוציק.
די פאלגענדע איז אַ סכעמע צו פאַרגרעסערן סענסיטיוויטי נאָך פאַרקערט טראַנסקריפּציע.איידער איר אָנהייבן, מיר דאַרפֿן צו פרעגן דאַונסטרים וואָס טאַרגאַץ מיר זענען אינטערעסירט אין, אַזוי צו פּלאַן ספּעציפיש פּרימערז פֿאַר די טאַרגאַץ פֿאַר פאַר-אַמפּלאַפאַקיישאַן.
דעם קענען זיין אַטשיווד דורך קריייטינג אַ געמישט אָנפאַנגער מיט אַרויף צו 100 פּערז פון אָנפאַנגער און אַ אָפּרוף ציקל פון 10-14 מאל.דעריבער, אַ מאַסטער מיקס ספּאַסיפיקלי דיזיינד פֿאַר דעם פאָדערונג איז דארף צו פאַר-אַמפּלאַפיי די cDNA באקומען.
די סיבה פֿאַר באַשטעטיקן די נומער פון סייקאַלז צווישן 10 און 14 איז אַז די לימיטעד נומער פון סייקאַלז ינשורז ראַנדאַמנאַס צווישן די פאַרשידן טאַרגאַץ, וואָס איז קריטיש פֿאַר ריסערטשערז וואָס דאַרפֿן קוואַנטיטאַטיווע מאָלעקולאַר אינפֿאָרמאַציע.
נאָך פאַר-אַמפּלאַפאַקיישאַן, מיר קענען באַקומען אַ גרויס סומע פון cDNA, אַזוי אַז די דיטעקשאַן סענסיטיוויטי אין די צוריק-סוף איז זייער ימפּרוווד, און מיר קענען אפילו צעפירן די מוסטער און דורכפירן קייפל פאַקטיש-צייט פּקר ריאַקשאַנז צו עלימינירן מעגלעך טראַפ ערראָרס.
פּאָסטן צייט: אפריל 11-2023